La muestra de orina reacciona con los reactivos desecados unidos a una fase sólida que se encuentra adherida a un soporte plástico. Se proveen reactivos para la detección de urobilinógeno, glucosa, cetonas, bilirrubina, proteínas, nitrito, pH, sangre, densidad, leucocitos y ácido ascórbico. Los principios químicos de cada prueba son los siguientes:
UROBILINÓGENO: La prueba está basada en la reacción de unión de una sal de diazonio con el urobilinógeno urinario en un medio ácido. El color vira del rosa pálido al rosa intenso. No puede demostrarse por este método la ausencia completa de urobilinógeno. Orinas normales dan habitualmente colores levemente rosados. Concentraciones de formol mayores a 0,2% pueden dar resultados falsamente negativos. Concentraciones de nitrito superiores a 2,5 mg/dl negativizan la reacción.
GLUCOSA: Reacción enzimática secuencial donde la glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la glucosa dando ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. Luego, la peroxidasa cataliza la reacción del peróxido de hidrógeno con ioduro de potasio, formándose productos coloreados que van desde celeste verdoso, pasando por marrón verdoso intermedio, a marrón. La reactividad de la prueba es menor con el aumento de pH de la orina. También puede variar con la temperatura. El ácido ascórbico en concentraciones ≥ 25 mg/dl ocasionan
falsos negativos y los cuerpos cetónicos en concentraciones > 40 mg/dl disminuyen la sensibilidad de la reacción. Orinas conteniendo levodopa o dipirona pueden dar falsos negativos.
CETONAS: Se basa en la reacción de ácido acetoacético de la orina con nitroprusiato. El color resultante va desde tostado, cuando no hay reacción, a distintos tonos de púrpura para reacciones positivas. Pueden aparecer resultados falsamente positivos con orinas altamente pigmentadas o aquellas que contengan grandes cantidades de levodopa.
BILIRRUBINA: La reacción se basa en la unión de la bilirrubina con la sal de diazonio del 2,4-diclorofenilo en un medio fuertemente ácido. El color cambia de tostado suave a tostado intenso. Dado que la bilirrubina es fotosensible, la exposición de la misma a la luz puede ocasionar falsos negativos. Pueden obtenerse resultados falsamente positivos cuando se administran, para diagnóstico o como componentes de medicamentos, colorantes que se excretan por orina.
PROTEINAS: Basada en el cambio de color del indicador, azul de tetrabromofenol, en presencia de proteínas. Una reacción positiva está indicada por un cambio de color del amarillo verdoso al verde, y luego al verde intenso. Orinas alcalinas (pH 9) pueden dar resultados falsamente elevados. La interpretación de los resultados también se dificulta en orinas turbias.
NITRITOS: Esta prueba está basada en la reacción de ácido p-arsanílico y nitrito, derivado del nitrato de la dieta en presencia de bacterias de la orina, para formar un compuesto de diazonio. Este compuesto reacciona con N-(1-naftil) etilendiamina en un medio ácido. El color resultante es rosa. Cualquier tonalidad rosada es considerada positiva. Cualquier tonalidad rosada uniforme debe ser considerada resultado positivo, sin embargo puntos rosas o color rosado en las esquinas no debe ser interpretado
como positivo. El desarrollo de color no es proporcional a la cantidad de bacterias presentes. La prueba de nitrito sólo detecta bacterias reductoras de nitrato, por lo que un resultado negativo no descarta completamente la contaminación de la orina. La prueba se negativiza con concentraciones de
ácido ascórbico mayores o iguales a 50 mg/dl. Pueden obtenerse resultados falsamente positivos cuando se administran medicamentos con colorantes que se excretan por orina.
pH: Esta prueba está basada en indicadores dobles (rojo de metilo y azul de bromotimol) los cuales dan un amplio espectro de colores cubriendo el rango de pH urinario completo. Los colores varían desde ocre, pasando por verdoso amarillento, a verde azulado. El crecimiento bacteriano en la orina determina un aumento real del pH, por liberación de amoníaco a partir de la urea. La coloración de la orina puede interferir con la determinación.
SANGRE: Esta prueba está basada en la actividad de pseudoperoxidasa de la hemoglobina, la cual cataliza la reacción de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina con hidroperóxido orgánico tamponado. El color resultante varía desde verdoso-amarillento, pasando por verde azulado, hasta azul oscuro. En ocasiones se observan falsos positivos cuando existe bacteriuria. El ácido ascórbico o las proteínas pueden reducir la sensibilidad de la prueba de sangre. Oxidantes fuertes como los hipocloritos pueden producir resultados falsamente positivos. La orina de mujeres en período menstrual puede producir falsos positivos.
DENSIDAD: Basado en el cambio de pKa. En presencia de los cationes urinarios, se liberan protones de un polielectrolito produciéndose un cambio de color en el indicador azul de bromotimol desde azul a amarillo. Pueden obtenerse lecturas altas de densidad en presencia de cantidades moderadas de proteínas (100-700 mg/dl). La bacteriuria aumenta el amoníaco, que tampona el medio e impide que el parche de densidad muestre el color correspondiente a la densidad real, por lo que se determinan densidades falsamente disminuidas.
LEUCOCITOS: Esta prueba revela la presencia de esterasas
granulocitarias. Las esterasas escinden un derivado del éster pirazol aminoácido para liberar un derivado de hidroxipirazol que luego con la sal de diazonio determina un producto violeta. El formol puede producir falsos positivos. Las proteínas disminuyen la sensibilidad de la determinación en concentración superior a 500 mg/dl.
ACIDO ASCORBICO: Esta prueba está basada en el efecto reductor del ácido ascórbico. Comprende un compuesto aromático coloreado en su estado oxidado, que se decolora cuando es reducido por el ácido ascórbico. El color cambia del verde intenso al amarillo verdoso. Pueden obtenerse resultados falsos positivos con otros agentes reductores.
