Salen el rey don Alfonso y don Diego Tenorio. Éste informa al rey del asunto de su hijo con la duquesa Isabela. El rey le pregunta que donde se encuentra ahora y él le contesta que anoche llegó a Sevilla con un criado.
El rey le informa de su intención de casar "a ese rapaz con Isabela, volviendo a su sosiego al duque Octavio, que inocente padece", y luego pretende desterrar a don Juan. Su padre pregunta que a donde y él le dice que en el destierro de Sevilla debe salir esa misma noche a Lebrija. Pero le pregunta qué debe decirle a Gonzalo de Ulloa, pues lo casó con su hija y ahora no sabe como remediarlo. El rey pretende hacer algo para absolverlo de su enojo, nombrarle mayordomo mayor.
Sale un criado anunciando la llegada del duque Octavio. El rey dice que seguro supo del desatino de don Juan y viene a vengarse, a pedir que se le otorgue desafío. Don Diego aboga por su hijo y le pide al rey que evite el desafío. Sin embargo parece ser que Octavio no sabe nada de don Juan. El rey se da cuenta y le dice a Octavio que sabe que es inocente, que le hablará al rey de Nápoles y que además lo casará en Sevilla con la hija del Comendador Mayor de Calatrava, Gonzalo de Ulloa. Ordena a don Diego que hospede al duque.
Se van el rey y don Diego y sale Ripio. Octavio le cuenta su buena suerte, pues no solo van a enmendar su afrenta con el rey de Nápoles, sino que además lo piensan casar con una mujer de Sevilla, que tienen fama de guapas.
Salen Catalinón y don Juan. Ven al duque y don Juan le dice que disimulen. Don Juan le dice al duque que como salió tan deprisa de Nápoles no tuvo tiempo de despedirse de él y éste le contesta que hoy se juntarán los dos en Sevilla. Hablan y comparan a Sevilla y a Nápoles.
Llega el marqués de la Mota. Don Juan dice que fuerza es ser descortés. Octavio le ofrece su brazo y su espada y Catalinón les dice que los espera en la taberna. Salen Octavio y Ripio. Entra el marqués y don Juan le pregunta por las mujeres de Sevilla, Inés, Constanza, Teodora, Julia. Mota le habla también de una mujer, un amor imposible, de la que anda prendado, su prima, doña Ana. Le dice que es la más hermosa. Juan le dice que entonces se case con ella y Mota le contesta que el rey ya la tiene casada y no se sabe con quién. Sin embargo dice que lo favorece y le escribe. Don Juan lo anima a que la solicite, le escriba y la engañe si hace falta. Mota dice que va a oír "la postre resolución", parece ser del casamiento.
Don Juan le pide a Catalinón que siga al marqués, queda solo y desde la reja una mujer lo llama y le entrega una carta para Mota de una señora. Él sospecha que se trata de la tal Ana, la abre y lee que la muchacha cita a su primo esa noche. La puerta estará abierta a las once, "llevará Leonovilla por señas y las dueñas, una capa de color." Se propone un nuevo engaño. Llega Catalinón y de nuevo lo reprende. Don Juan lo llama impertinente y Catalinón le asegura su lealtad.
Llega Mota y don Juan le cuenta lo del mensaje y le dice que se presente a las doce y que lleve la capa de color. Mota se lo agradece y don Juan goza la burla por dentro. Se va el marqués y vuelve don Diego que le anuncia a su hijo el destierro ordenado por el rey en Lebrija. Se va el viejo enternecido y don Juan se burla de él. Catalinón le dice que a todas las doncellas deberían de avisar de un hombre que a todas engaña y que es el burlador de Sevilla. Don Juan sin embargo se enorgullece del nombre que le ha dado su lacayo.
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Sale el marqués, de noche, con músicos, y pasea el tablado y se entran cantando. Don Juan se los encuentra y dice al marqués que lo reconoció por la capa. Mota le dice que busca la casa de don Gonzalo de Ulloa en la calle Sierpe, donde viven mucho de Portugal. Don Juan dice: "Mientras a la calle vais, yo dar un perro quisiera". Parece ser que don Juan se va a encontrar con alguna mujer. Mota le presta su capa para que lo de mejor y hasta le indica una casa donde hay una que él conoce y donde puede entrar con la contraseña de "Beatriz": Salen todos, mientras los músicos cantan "Todo este mundo es errar. / El que un bien gozar espera, / cuanto espera desespera.
Desde dentro se oye una voz que grita: "¡Falso!, no eres el marqués, que me has engañado". Sale don Gonzalo espada en mano y Ana grita para que mate al traidor. Salen Catalinón y don Juan también con las espadas desenvainadas. Don Juan le dice que los deje pasar, discuten y Juan mata a don Gonzalo. Huyen don Juan y Catalinón.
Entran muerto a don Gonzalo y salen el marqués de la Mota y los músicos. Se encuentran don Juan y Catalinón al marqués y don Juan le devuelve la capa. Se van y queda solo el marqués, que se acerca a la casa. Aparecen don Diego Tenorio con guardas y lo prenden ante su sorpresa. Aparece también el rey y su acompañamiento y manda el rey que procesen al marqués y luego le corten la cabeza.
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Salen Batricio, desposado con Aminta; Gaseno, viejo; Belisa y pastores músicos. Cantan y los novios hablan de la dicha de su matrimonio. Aparece Catalinón pidiendo que los acepten de huéspedes en el desposorio. Preguntan que a quienes deben hospedar y Catalinón contesta que al noble don Juan. Se lamenta Batricio, pues dice que es de mala suerte invitar a una boda a un caballero galán, que quita gustos y celos da. Gaseno los acepta y Batricio sigue lamentándose. Aparece don Juan y se sienta junto a la novia. Catalinón piensa: “¡Desventurado marido!”, pues ya sospecha lo que trama su señor. Don Juan empieza a mostrarse lisonjero con la novia, Catalinón ya teme que aquellos hombres les den muerte y Batricio sigue renegando de su mala fortuna.
