Kathryn Hahn

Spider-Man: A New Universe (Stimme)

Miles Morales / Spider-Man - Shameik Moore

Jefferson Davis - Brian Tyree Henry

Rio Morales - Lauren Vélez

Aaron Davis - Mahershala Ali

Peter Parker / Spider-Man - Chris Pine

Gwen Stacy / Spider-Gwen - Hailee Steinfeld

Peter B. Parker / Spider-Man - Jake Johnson

Peter Parker / Spider-Man Noir - Nicolas Cage

Peni Parker / SP//dr - Kimiko Glenn

Peter Porker / Spider-Ham - John Mulaney

May Parker - Lily Tomlin

Mary Jane „MJ" Watson - Zoë Kravitz

Wilson Fisk / Kingpin - Liev Schreiber

Vanessa Fisk - Lake Bell

Dr. Octavius / „Doc Ock" - Kathryn Hahn

Norman Osborn / Grüner Kobold - Jorma Taccone

Lonnie Lincoln / Tombstone - Marvin „Krondon" Jones III

Scorpion - Joaquín Cosío

Miguel O'Hara / Spider-Man 2099 - Oscar Isaac

Stan - Stan Lee

Die Hauptfigur ist Miles Morales, der frisch von einer Spinne gebissen wird und seine Spinnenkräfte wie die von Spider-Man entwickelt. In seiner Welt beobachtet er, wie Peter Parker alias Spider-Man bei einem Experiment von Kingpin und seinen Handlangern, wie dem Grünen Kobold und Prowler, stirbt. Er verspricht Peter kurz vor dessen Tod, diese aufzuhalten. Der Kingpin alias Wilson Fisk versucht mittels eines Teilchenbeschleunigers zur Dimensionskopplung seine Familie, die er seiner Meinung nach durch Spider-Man verloren hat, zurückzuerlangen. Dabei werden Spider-(Wo)Men von fünf Universen in das Universum von Miles gezogen. Nach und nach erfährt Miles, dass es ein Multiversum mit mehreren Spider-Man-Versionen gibt. Miles verbündet sich mit den Spider-Versionen der anderen Dimensionen, um den Kingpin und Doc Ock aufzuhalten und seine alternativen Versionen nach Hause zu schicken, was ihnen letztlich gelingt.