Resumén de Biologia Cel. - UBA - Baldoni

"Resumen de biologia del Cooper" - by: Luca Chami Siguelboi

Resumen de biología (Cooper)

Capitulo 1 – Visión global de las células e investigación celular

Microscopia

MO: limite de resolución: 0,2 micrometros

-De campo luminoso: cel teñidas muertas

-De contraste de fase y de interferencia-contraste diferencial: cel vivas  una es video potenciada: mov de organelas marcados

-De fluorescencia: para ver moléculas, ej. Proteínas vivas o muertas. Tinción fluorescente con proteínas GFP que se pega a la diana

-FRAP: para medir la tasa de mov de las proteínas.

-FRET: se ve la interacción de 2 proteínas en una celula.

-Confocal: mas detallada q la de fluorescencia

-de exitación multifotónica: se ven células vivas tridimensionales con laser.

ME: limite de resolución: 0,004 nanometros

-MET: tintes positivos o negativos

-Tomografía electrónica: 3d a partir de 2d

-Sombreado de metal: superficies de estructuras subcelulares o macromoléculas. Imagen 3D por sombreado

(Kriofractura: separación por congelación con un bisturí para ver elementos de la membrana)

-MEB: imágenes 3D limite de resolución: 10 nanometros. SOLO células enteras (superficie). Para endocitosis y exocitosis, cilios y flagelos

Separacion/fraccionamiento subcelular

-Centrifugación diferencial: aislar organelas

1. Para hacer la centrifugación hay que romper la membrana plasmática y RE: por licuación, sonicación, detergente, reducción, shock osmótico (ponerlo en agua)

2. Ultracentrifugacion: las estructuras se van sedimentando (decantando) según el peso. Lo primero q decanta (lo mas pesado) son el nucleo y cél enteras que quedaron sin romper. Lo segundo que decantan son mitocondrias, cloroplastos, lisosomas y peroxisomas. Lo tercero que decanta son fragmentos de membrana plasmática y de RE. Lo ultimo que decanta son ribosomas y citosol

Pelet: lo que cae. Sobrenadante: lo que queda arriba.

-Centrifugacion en gradiente de densidad: separa organelas de similar tamaño. Ej. sacarosa

-Centrifugación de equilibrio: separar compuestos subcelulares en función de su migración en un gradiente de densidad.

Shock de baja osmolaridad: para membrana de mitocondrias

Cultivos

Proteomica: análisis de las proteínas

-Proteoma: identificación y cuantificación, interacción y localizacion de las proteínas

-Metodos para identificar proteínas:

Electroforesis en gel bidimensional: separación de proteínas a gran escala (proteínas mas abundantes).

1 electroforesis: se establece un gradiente de pH y se separan según su carga

2 electroforesis: se separan por tamaño molecular

3. se tiñe el gel para verlas

4. se las extrae del gel y se las identifica en una base de datos por espectrometría de masas

-Metodos para localizar proteínas: fraccionamiento celular + marcar con GFP y miras con microscopio de fluorescencia

-Metodos para la interacción de proteínas: se aíslan proteínas de forman suaves para q sigan formando parte del complejo y se hace una espectometria de masas.