Las técnicas de anticuerpos fluorescentes descritas son instrumentos cualitativos extremadamente valiosos, pero no proporcionan datos cuantitativos.
Este inconveniente se eliminó con el desarrollo del citómetro de flujo, que se diseñó para automatizar el análisis y la separación de células teñidas con anticuerpo fluorescente.
La citometría analiza de manera simultanea y objetiva múltiples características de una célula o partícula en poco tiempo. Analiza una célula o partícula de todo a todo a la vez rápidamente.
Puede usarse para analizar cualquier partícula, mientras este en suspensión, sea unicelular y tenga tamaño de 0.2 y 70µm.
El uso del instrumento para determinar qué población celular y cuántos de sus miembros unen anticuerpos marcados con fluorescencia se denomina análisis.
El empleo del instrumento para colocar células que tienen diferentes patrones de reactividad en contenedores distintos se denomina clasificación celular.
La citometría de flujo también permite analizar poblaciones celulares que se marcaron con dos o incluso tres diferentes anticuerpos fluorescentes.
Características de la muestra:
● Tamaño o volumen relativo (FSC 0.5-5° para luz).
● Granulosidad o complejidad interna SSC (15-150° para luz).
● Intensidad de fluorescencia (laser).
Propiedades de FSC y SSC.
-Forward Scatte - FSC (Frontal)
Relacionado con el tamaño/ volumen de la partícula.
Detecta dispersión de la luz frontal.
-Side Scatter - SSC (Lateral)
Relacionado con la granulosidad/ complejidad de la partícula.
Detecta dispersión de la luz lateral.
Interferencias con la dispersión de luz:
● Forma/ estructura.
● Tamaño.
● Características de membrana.
● Presencia de granos.
● Complejidad interna (organelos).
Evento: Toda partícula y célula que pasa y sea detectada por el laser
Detrito: Basura
Marcadores.
Son como la huella dactilar de cada célula. Clusters of differentiation.
Fluorescencia Marcaje
Doble positiva ----> CD3+, CD4+
Positiva para A ----> CD3+, Linfocitos T en general.
Puede medir:
● Apoptosis
● Viabilidad celular
● Flujo de calcio
● Conteo de células
● Ciclo celular y DNA
● Transfección de GFP
●Inmunofenotipo
● Microbiología
● Multiplex beads
● RNA knockdown
● Células madre
● Sexuado de células (semen) .
● Fagocitosis
● Señalización intracelular
● Separación (sorting).
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Biología Celular
القصة القصيرةEl objetivo de este libro es poder prepararme para los exámenes de las diversas materias que curso en mi carrera, lo hago de está manera ya que así es más cómodo para mi estudiar, toda la información la obtengo de las anotaciones en mi libreta. Si l...
