El objetivo de este libro es poder prepararme para los exámenes de las diversas materias que curso en mi carrera, lo hago de está manera ya que así es más cómodo para mi estudiar, toda la información la obtengo de las anotaciones en mi libreta. Si l...
La Resonancia de plasmones superficiales permite medir la afinidad de un anticuerpo, es una técnica sensible, práctica y rápida, el método es directo e ingenioso.
Permite la medición constante de la afinidad, y puede usarse para determinar la rapidez de las reacciones Ag-Ab e incluso puede adaptarse para medir concentraciones de Ab.
Funciona detectando cambios en las propiedades de reflectancia de la superficie de un detector recubierto de antígeno cuando se une a anticuerpo.
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Un haz de luz polarizada se hace pasar por un prisma hacia una delgada película de oro (cubierta con antígeno del lado opuesto) y se refleja en la película hacia un detector colector de luz.
A un ángulo único, parte de la luz incidente es absorbida por la capa de oro, y su energía se transforma en ondas de carga llamadas plasmones superficiales.
El ángulo, llamado ángulo de resonancia, hace posible medir una caída abrupta en la intensidad de la luz reflejada, y este es proporcional al número de Ab unidos.
Midiendo la rapidez con que el ángulo de resonancia cambia durante una reacción Ag-Ab es posible determinar la rapidez de esta reacción.
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La gráfica de los cambios medidos durante el experimento de SPR contra el tiempo se denomina sensograma.
Consta de 4 etapas:
Etapa I. Sin Ab no se forma complejo Ag-Ab.
Etapa II. Se agrega Ab al flujo y se forma complejo Ag-Ab.
Etapa III. La formación de complejos se estabiliza.
Etapa IV. La cámara se lava con solución amortiguadora, y se disocian los complejos Ag-Ab.
En una reacción Ag-Ab el sensograma asciende hasta que todos los sitios capaces de unirse a antígeno.
