Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ,например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке ее в ржавых кастрюлях. Лучше всего пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Большие количества среды (десятки и сотни литров ) готовят в специальных варочных котлах или реакторах. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятят 30 минут в 1 - 2 процентов растворе хлороводородной кислоты или погружают в этот раствор на ночь, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.
(Посудой, предназначенной для приготовления сред, нельзя пользоваться в других целях, например для хранения химических реактивов или дезинфицирующих растворов - даже следы этих веществ могут помещать росту микроорганизмов.)
Исходным сырьем для приготовления большинства сред служат продукты животного или растительного происхождения : мясо и его заменители, молоко, яйца, картофель, соя, кукуруза, дрожжи и другие.
Основные питательные бульоны готовят на мясной воде или на различных переварах,полученных при кислотном или ферментативном гидролизе исходного сырья. Бульоны из переваров в 5 - 10 раз экономичнее, чем из мясной воды. Среды на переварах богаче аминокислотами, следовательно, питательнее; обладают большей буферностью, то есть имеют более стабильную величину pH. Кроме того, препараты можно готовить из заменителей мяса ( сгустков крови, плаценты, казеина и т. д.).
В настоящее время снабжение лабораторий мясной водой и переварами централизовано. Чаще пользуются панкреатическим переваров Хоттингера, гидролизатами казеина или кормовых дрожжей. Из этих полуфабрикатов, по определенным рецептам, готовят необходимые среды.
Этапы приготовления сред : 1) варка; 2) установление оптимальной величины pH; 3) осветление; 4) фильтрация; 5) разлив; 6) стерилизация; 7) контроль.
Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах, подогреваемых паром.
Установление pH сред ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек. Для точного определения pH используют потенциометр.
Разливают среды в пробирки ( по 3 - 5 мл или по 10 мл ),флаконы, колбы, матрицы и бутылки не более чем на 2/3 ёмкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность. Среды, которые стерилизуют при температуре выше 100 ° С, развивают в чистую сухую посуду. Среды, стерилизуемые при более низкой температуре обязательно развивают в стерильную посуду.
