Основные методы определения микробиологических показателей, характеризующих фекальное загрязнение почв.
Определение кишечных палочек в почве титрационным методом.
Из первого разведения почвенной суспензии ( 1 : 10 ) берут 10 мл и засевают во флаконы с 50 мл жидких сред ( Кесслера или лактозного бульона с трифенилтетразолием хлорида ТТХ ). Посев меньших количеств ( 0,1 г, 0,01 г и так далее ) делают по 1 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9 мл тех же сред.
Перед посевом в каждую пробирку с лактозным бульоном прибавляют по 0,3 мл 2% водного раствора ТТХ , а в каждой флакон - по 1,5 мл. Методика с использованием ТТХ основана на способности кишечной палочки восстанавливать бесцветное соединение ТТХ с трифенилформазаном, выпадающем в виде осадка и придающим среде коричневато - красный цвет. Кишечная палочка устойчива к действию формазана, в то время как развитие другой микрофлоры тормозится.
Посевы на среде Кесслера выращивают 48 часов при 43 ° С или 37 ° С. Отсутствие через 48 часов газообразования и помутнения в бродильных сосудах даёт окончательный отрицательный ответ на наличие бактерий группы кишечных палочек. Отрицательный ответ на лактозном бульоне с ТТХ даётся через 24 часа в том случае, если в пробирках и флаконах цвет среды не изменился.
При наличии в сосудах со средой Кесслера газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на среду Эндо. Чашки с посевами помещают в термостат на 24 часа при температуре 37 ° С. Отсутствие роста на чашках даёт окончательный отрицательный ответ.
При наличии на поверхности среды Эндо розовых или красных колоний грамотрицательных палочек с отрицательной оксидазной активностью, их подсчитывают и причисляют к бактериям группы кишечных палочек после подтверждения ферментации глюкозы. Для этого засевают 2 - 3 колонии каждого типа в полужидкую среду с глюкозой. Учёт производят через 4 - 5 и 18 часов инкубации при температуре 37 ° С. Если за это время в среде происходит образование кислоты и газа, то это подтверждает наличие кишечных палочек в исследуемом разведении почвы. Результаты анализа выражают колититром.
Определение в почве общего количества бактерий.
Для характеристики в почве общего микробного загрязнения фекального происхождения используют определение численности микроорганизмов, преимущественно бактерий, присущих на мясопептонном ангаре при 37° С. При этом производят посев почвенных разведений в 1,5 % мясопептонный агар. Из каждой пробы почвы для посева должено быть использовано не менее двух различных разведений. Берут 1 мл суспензии и переносят на дно стерильной чашки. Из каждого разведения посев производят минимум на 2 параллельные чашки. После в каждую чашку вливают предварительно расплавленный и остуженный до 45 ° С питательный агар в количестве 15 - 20 мл. Чашки Петри с расплавленным агаром хорошо перемешивают с имеющейся там почвенной суспензией. Затем чашки помещают на строго горизонтальную поверхность до затвердевания среды. После застывания агара чашки с посевом в перевёрнутом виде помещают в термостат 37° С на 24 часа. После инкубации подсчитывают выросшие колонии.
